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  • 所属分类:其它资料

    上传时间:2017/10/17

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  • 上传公司:上海谷研实业有限公司进入展台
  • 标签:试剂盒  

资料简介

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猴结核分枝杆菌抗体 IgG(M.tuberculosis-IgG)表达。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中结核分枝杆菌抗体IgG(M.tuberculosis-IgG)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与 CUTOFF 值相比较,从而判定标本中猴结核分枝杆菌抗体
IgG(M.tuberculosis-IgG)的存在与否。

试剂盒组成

1
30 倍浓缩洗涤液
20ml×1 瓶
7
终止液
6ml×1 瓶

2
酶标试剂
6ml×1 瓶
8
阳性对照
0.5ml×1 瓶

3
酶标包被板
12 孔×8 条
9
阴性对照
0.5ml×1 瓶

4
样品稀释液
6ml×1 瓶
10
说明书
1 份

5
显色剂 A 液
6ml×1 瓶
11
封板膜
2 张

6
显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1 个

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。


加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

温育:操作同 3。

洗涤:操作同 5。

显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。


操作程序总结:

计算和结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴 性 判 定 : 样 品 OD 值 < 临 界 值 ( CUT OFF ) 者 为 结 核 分 枝 杆 菌 抗 体

IgG(M.tuberculosis-IgG)阴性阳 性 判 定 : 样 品 OD 值 ≥ 临 界 值 ( CUT OFF ) 者 为 结 核 分 枝 杆 菌 抗 体


IgG(M.tuberculosis-IgG)阳性。

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为 630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 个月

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